PCR实验室

基因扩增实验又称PCR实验，其特点是能将微量的DNA大幅增加，PCR是分子生物学研究和实验的常规方法，广泛应用于生物学各个领域，例如：艾滋病检测、乙型肝炎、禽疫病、癌基因的检测和诊断，DNA指纹、个体识别、亲子鉴定及法医物证，动、植物检疫，动物及其衍生产品检测，动物饲料、化妆品、食品卫生检测，转基因作物与转基因微生物检测等。pcr实验室有效避免在实验过程中造成试剂、标本、扩增物以及操作人员的交叉污染,保证人员安全及实验数据可靠。

一、PCR基因扩增实验室必须拥有的条件：

1、必须在无菌无尘环境下进行操作；

2、检测人员必须通过国家临检中心业务培训并取得合格证书；

3、必须通过国家临床检验中心的验收和认证；

4、检测设备必须符合标准PCR荧光实验室设置要求；

5、必须拥有标准的的PCR荧光实验室；

二、PCR基因扩增实验室建立办法流程：

1、建立样品准备区；

2、样品准备和RNA-PCR RNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作，这样增加了样品之间污染的机会。为了避免这一问题，反转录一步可以在样品准备区进行。在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道；

3、建立前PCR区；

4、PCR实验室试剂的操作；

5、在前PCR区建立PCR混合物；

6、控制污染的方法；

7、后PCR区PCR完成以后，需要分析样品并解释数据，应该留出一个专门用于反应后处理样品的地方；

三、PCR实验室布局

要完成一组pcr实验，通常需要经过试剂配制、样品处理、核酸扩增和产物分析4个实验过程。这4个实验过程的实验用房应相邻布置，组成一个独立的pcr实验区。标准的pcr实验区包括:试剂准备区、标本制备区、扩增区、产物分析区、各区配套的缓冲区及公共走廊。

1.试剂准备区

该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区，不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的贮存试剂。

试剂准备区配备有2~8°C冰箱和-80°C冰箱，计算冷负荷时，需要将它们计算在内。

房间的面积宜控制在15㎡~20㎡。本区的压力梯度要求为:相对正压状态，以防止外界含核酸气溶胶的空气进入，造成污染。

2.标本制备区

该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。标本制备区配备有2~8°C冰箱和-20°C冰箱，计算冷负荷时，需要将它们计算在内。在标本制备区，还需要配备生物安全柜，用于进行提取核酸的操作。

为避免提取的核酸在柜内反复循环，造成标本之间的交叉污染，出现假阳性结果，该区域配备的生物安全柜必须是B2型的。生物安全柜工作区垂直气流全部来自实验室，排风经过高效过滤器过滤后直接排至室外，不允许回到安全柜和实验室中。

根据经验，如果实验室内配备生物安全柜，每配备一台，实验室的面积增加10m2;标本制备区的面积宜在25㎡~30㎡之间。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。

3.扩增室

该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外，已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进 行。

在巢式PCR测定中，通常在第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢式扩增有较高的污染危险性，第二次加样必须在本区内进行。

扩增室主要配备PCR实验室的核心仪器PCR仪，在实验室建造过程中，需要给PCR仪配备专门的UPS电源，以保证其正常工作。该区面积控制在15㎡~20㎡。

本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。建议采用  5~10Pa压差，在控制上比较容易实现。

4.产物分析区

该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。

在室内配备通风橱，保证房间内的相对负压，空气从室外流向室内。该区面积控制在15㎡~20㎡。本区是最主要的扩增产物污染来源，因此对本区的压力梯度的要求为:相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。建议采用5~10Pa压差，在控制上比较容易实现。

5.正负压区域缓冲室的设置

根据压力梯度的要求，试剂配制室和样品处理室为相对正压，扩增室和产物分析室为相对负压，要求正压的区域和要求负压的区域的缓冲室内的压力设计大不相同

四、PCR实验室装修装饰

实验室围护结构应牢固、气密性好；所有阴阳角宜采用圆弧过渡；墙体内壁光洁、不积尘、耐腐蚀、易清洗消毒；地面使用PVC卷材或环氧树脂自流坪，材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。注意事项：

1、几个区域的大小设置情况，试剂准备区、扩增区、扩增产物分析区，空间可以相对小一些，样品制备区要放置生物安全柜和低温冰箱，空间应大一些。

2、试剂准备区、样品制备区设紧急洗眼器，以保证操作人员的安全。

3、PCR实验室没有严格的净化要求，可以根据用户的使用情况和资金的投入选择。

总之PCR基因扩增实验室，从实验室设计，实验室规划到实验室建设都是技术含量比较高的系统工程，需要专业公司团队开展，否则无法达到理想效果，中晶在PCR基因扩增实验室有着丰富的实践经验，如有需要建PC实验室及了解相关，欢迎来电咨询：13051005692（微信同号）